c18色譜柱出廠時(shí)一般都封裝有甲醇或乙腈等有機(jī)溶劑。隨著時(shí)間的推移,色譜柱內(nèi)的有機(jī)溶劑緩慢揮發(fā),色譜柱內(nèi)可能出現(xiàn)氣泡。因此,新購買的色譜柱在使用前一般都要進(jìn)行活化操作。
c18色譜柱的基質(zhì):
硅膠基質(zhì):通用的基質(zhì),強(qiáng)度大,化學(xué)修飾容易,但使用的pH值范圍有限(一般為2—8,特殊修飾的可以達(dá)到1—12)。
聚合物基質(zhì):多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化學(xué)穩(wěn)定,應(yīng)用pH范圍寬,具有更強(qiáng)的疏水性,對(duì)蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好;但強(qiáng)度較小,有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物溶脹而受損,批次重復(fù)性較差,商品化色譜柱不多,一般價(jià)格較貴。
載碳量:基質(zhì)表面鍵合相的比例,載碳量高,則保留增加,適合分析非極性化合物。
鍵合相:鍵合試劑不同,對(duì)化合物的選擇性不同,一般長鏈的烷基鍵合相(C18、C8)比短鏈的(C4、C3)穩(wěn)定;非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩(wěn)定。
老化色譜柱是氣相應(yīng)用的一項(xiàng)常見工作,老化的目的在于去除固定相表面不穩(wěn)定的固定相流失碎片或污染物,讓色譜柱為即將進(jìn)行的分析做好準(zhǔn)備。通常,新柱初次使用、色譜柱放置一段時(shí)間后再次使用、或色譜柱受到一定污染或損傷后都需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)睦匣?/div>
老化的注意事項(xiàng):
1、老化的溫度一般不要超過色譜柱的恒溫溫度上限,初次老化可以升溫至色譜柱zui高使用溫度(程序升溫溫度上限)老化一段時(shí)間,建議不超過10min;
2、對(duì)于強(qiáng)極性色譜柱(如聚乙二醇固定相),建議采用較緩的程序升溫,如5°C/min。