凝膠色譜柱的填料是以剛性的球形硅膠為基質(zhì),在其表面通過共價(jià)鍵化學(xué)鍵合親水團(tuán)而成。色譜柱的填料具有高性能尺寸排阻色譜所需的性能,即低吸附性和良好的孔徑分布;其pH適合范圍為2.5~7.5,可以使用與水*互溶的有機(jī)溶劑,如乙腈、丙酮、甲醇或乙醇等。
凝膠色譜柱的填料是親水而剛性,多孔球型,化學(xué)和機(jī)械性能都非常優(yōu)異的聚合物。適用于以凝膠色譜的模式分析分離蛋白質(zhì)、多肽、多糖、寡糖、DNA、RNA、水溶性的有機(jī)聚合物和其他水溶性大分子樣品等。
凝膠色譜柱的應(yīng)用也越來越廣泛,使用過后也要對(duì)色譜柱進(jìn)行保養(yǎng),這樣才能使它的使用壽命更長久。為了不使被測(cè)物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中,在每次的樣品分析工作完成之后,都應(yīng)及時(shí)地清洗色譜柱。
首先要用對(duì)被測(cè)樣品洗脫能力強(qiáng)的溶劑來洗脫色譜柱,以分析工作中常用的反相色譜分析法為例,因其先流出的物質(zhì)是極性大的物質(zhì),此時(shí)應(yīng)用純甲醇或使用異丙純等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來,洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動(dòng)相是緩沖溶液,則應(yīng)先用蒸餾水來沖洗色譜柱,以沖掉柱內(nèi)的鹽,然后再用合適的溶劑來沖洗。
如果色譜柱長期不用,僅用上述方法來處理就不行了,這時(shí)應(yīng)使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱,凝膠柱則不能用水了,因柱內(nèi)如果有微生物的生長則會(huì)使柱效降低,此時(shí)應(yīng)用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱,再將色譜柱封嚴(yán)。色譜柱長期放置時(shí),一定要將色譜柱的兩端封嚴(yán),以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象,因這可導(dǎo)致柱效的嚴(yán)重降低。