反相c18色譜柱與其它普通聚合物基質(zhì)反相色譜柱相比,理論塔板數(shù)提高了2倍,與ODS色譜柱比較,對(duì)高極性物質(zhì)的保留能力強(qiáng);適用于分析含有蛋白質(zhì)的藥物等低分子反相分析。它的選擇性主要為疏水作用、立體選擇性和氫鍵作用,還有一些二級(jí)作用,比如:離子交換、金屬螯合作用等。
清洗:
再生被污染HPLC柱子的關(guān)鍵是知道污染物的性質(zhì)并且能找到適當(dāng)?shù)娜軇﹣砣コ?/div>
如果污染是因?yàn)橹貜?fù)進(jìn)樣時(shí)強(qiáng)保留物質(zhì)的累積引起的,利用簡(jiǎn)單的清洗步驟來除去這些污染物往往就能恢復(fù)其色譜性能。經(jīng)過等度運(yùn)行后的反相c18色譜柱,有時(shí)用90~100%含量的溶劑B沖洗20個(gè)柱體積可以清除污染物。
如果使用的是緩沖鹽系統(tǒng),不要直接切換到強(qiáng)溶劑,突然轉(zhuǎn)換到高濃度有機(jī)溶劑可能會(huì)使HPLC流動(dòng)體系中的緩沖鹽沉淀,這樣會(huì)導(dǎo)致更大的問題
如果污染物不是生物質(zhì)的,一種強(qiáng)溶劑或幾種溶劑組合清洗基本能解決問題。反相c18色譜柱生產(chǎn)廠家的網(wǎng)頁和產(chǎn)品說明書上很多也有清洗方法推薦。
所有的清洗方法的模式普遍都類似,溶劑系列中所用溶劑的強(qiáng)度逐級(jí)增加,后一個(gè)溶劑往往是非極性(疏水性)很強(qiáng)的,以便于溶解脂質(zhì)、油類等非極性污染物。溶劑系列中每個(gè)溶劑都保證能與下一個(gè)溶劑互溶。
整個(gè)清洗過程結(jié)束后,在回到原來的流動(dòng)相體系前,必須借助一個(gè)中等強(qiáng)度的互溶性非常好的溶劑過渡。