反相c18色譜柱柱效高、分離能力強、保留機理清楚,是液相色譜分離模式中使用最為廣泛的一種,對于生物大分子、蛋白質(zhì)及酶的分離分析,反相液相色譜正受到熱烈歡迎。
在日常別離剖析工作中,反相c18色譜柱的正確運用和維護(hù)十分重要,色譜柱運用是否妥當(dāng),直接影響色譜柱的壽命,稍有不慎就會下降柱效、縮短運用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需求留意下列問題,以維護(hù)色譜柱。
(1)柱子在裝卸、替換時,動作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動,避免柱床產(chǎn)生空地。
(2)假如儀器用來做慣例剖析,樣品種類有限,但剖析次數(shù)多,則不妨為每一類慣例剖析配置一根專用柱,這樣有助于延伸柱子的壽命。
(3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械轟動。溫度的忽然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的忽然升高或下降也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)理流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
(4)應(yīng)逐
漸改動溶劑的組成,特別是反相色譜中,不該直接從有機溶劑改動為全部是水,反之亦然。
(5)如運用柱溫操控設(shè)備時,應(yīng)留意在通人活動相后才干升溫。
(6)一般說來反相c18色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱能夠反沖時,才能夠反沖除掉留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速下降柱效。
(7)選擇運用適合的活動相,以避免固定相被破壞。有時能夠在進(jìn)樣器前面連接一個預(yù)柱,剖析柱是鍵合硅膠時,預(yù)柱為硅膠,可使活動相在進(jìn)入剖析柱之前預(yù)先被硅膠“飽滿”,避免剖析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
8)避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi),需求對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和反相c18色譜柱之間連接一個維護(hù)柱。維護(hù)柱一般是填有類似固定相的短柱。維護(hù)柱能夠并且應(yīng)該經(jīng)常替換?! ?/div>